제품소개
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제품명 |
고양이. 아니요. |
투기. |
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알칼리성 인산분해효소(감열성) |
G3400-1000U |
1000 U |
제품소개
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제품 설명: |
Servicebio® 알칼리성 포스파타제(열감응성)는 DNA, RNA, dNTP 및 rNTP에서 5'- 및 3'- 인산염 그룹의 방출을 촉매합니다. 이 효소는 또한 단백질에서 인산염 그룹을 제거합니다. |
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신청: |
l 결찰 중 재순환을 방지하기 위해 클로닝 벡터 DNA의 탈인산화. l PCR 산물 정리: PCR 산물의 시퀀싱 이전에 뉴클레오티드 분해. l T4 폴리뉴클레오티드 키나아제로 라벨링하기 전 핵산 5'-말단의 탈인산화. |
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원천: |
복제된 박테리아 AP 유전자가 있는 대장균은 AntarcticBacteriumTAB5를 형성합니다. |
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청정: |
SDS-PAGE 기준 95% 이상 |
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분자량 |
~35kDa |
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집중: |
5 U/μL |
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활동 단위의 정의: |
1 단위는 37도에서 10분 동안 선형화된 pUC19 DNA 5' 말단 1μg의 탈인산화를 촉매하는 데 필요한 효소의 양입니다. 탈인산화는 선형화된 플라스미드 DNA의 연결이 95% 이상 억제되는 것으로 정의됩니다(대장균 형질전환에 의해 결정됨). |
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10× ALP 반응 완충액: |
500 mM Bis-Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM ZnCl2, pH 6.0. |
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저장(희석) 완충액: |
10 mM Tris-HCl, 1 mM MgCl2, 0.01 mM ZnCl2, 50% 글리세롤, pH 7.4. |
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비활성화 또는 억제 |
l 억제제: 금속 킬레이트제. · l 80도에서 2분간 가열하면 비활성화됩니다. |
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보관 조건: |
–20도에서 최대 12개월까지 보관할 수 있습니다. |
제품 내용
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구성요소 번호 |
요소 |
G3400-1000U |
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G3400-1 |
알칼리성 인산분해효소(감열성) |
200 μL |
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G3400-2 |
10×ALP 반응 버퍼 |
1mL |
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수동 |
1부 |
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분석 프로토콜/절차
이 프로토콜은 DNA와 RNA에서 3' 및 5'-인산염 그룹을 제거하는 데 적합합니다.
- 냉동된 시약을 해동하고 혼합한 후 짧게 원심분리합니다.
- 효소를 얼음 위에 보관하세요.
- 10×ALP 반응 버퍼를 실온에서 유지합니다.
1. 다음을 포함하는 다음 반응 혼합물을 준비합니다.
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요소 |
용량 |
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DNA 또는 RNA 샘플 |
1-5 ug |
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10×ALP 반응 버퍼 |
2 μL |
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알칼리성 인산분해효소(감열성) |
1 μL |
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뉴클레아제가 없는 물 |
20μL까지 |
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총량 |
20 μL |
2. 완전히 혼합하고 잠시 회전시킨 후 37도에서 15-30분 동안 배양합니다. 최적의 배양 시간과 효소 농도는 각 기질에 대해 실험적으로 결정되어야 합니다.
3. 80도에서 2분간 가열하여 반응을 정지시킨다.
4. 후속 실험의 필요에 따라, 상기 탈인산화된 DNA 또는 RNA는 다양한 방법(예: DNA 정제 키트, 페놀성 클로로포름 추출 및 에탄올 침전 방법)으로 정제될 수 있습니다.
메모
1. 알칼리성 포스파타제는 대부분의 알칼리성 포스파타제와 마찬가지로 Zn2+ 및 Mg2+-의존 효소입니다. ALP 반응 완충액은 효소 활성을 보장하기에 충분한 Zn2+및 Mg2+를 제공합니다.
1. 알칼리성 인산염 분해효소는 금속 킬레이트제(예: EDTA), 무기 인산염 및 인산염 유사체에 의해 억제됩니다.
1. 알칼리성 포스파타제 활성은 환원제(DTT, -ME) 존재 시 감소됩니다.
2. 알칼리성인산분해효소는 취급 시 얼음 위에 배송되어야 하며, 사용 후 즉시 -20도에서 보관해야 합니다.
1. 고객님의 안전과 건강을 위해 보안경, 장갑, 보호복을 착용하시기 바랍니다.
연구용으로만 사용하세요!
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