알칼리성 인산분해효소(감열성)

알칼리성 인산분해효소(감열성)
제품 소개:
카탈로그 번호:G3400-1000U
브랜드:서비스바이오
사양:1000U
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설명
기술적인 매개 변수

제품소개

 

제품명

고양이. 아니요.

투기.

알칼리성 인산분해효소(감열성)

G3400-1000U

1000 U

 

제품소개

 

제품 설명:

Servicebio® 알칼리성 포스파타제(열감응성)는 DNA, RNA, dNTP 및 rNTP에서 5'- 및 3'- 인산염 그룹의 방출을 촉매합니다. 이 효소는 또한 단백질에서 인산염 그룹을 제거합니다.

신청:

l 결찰 중 재순환을 방지하기 위해 클로닝 벡터 DNA의 탈인산화.

l PCR 산물 정리: PCR 산물의 시퀀싱 이전에 뉴클레오티드 분해.

l T4 폴리뉴클레오티드 키나아제로 라벨링하기 전 핵산 5'-말단의 탈인산화.

원천:

복제된 박테리아 AP 유전자가 있는 대장균은 AntarcticBacteriumTAB5를 형성합니다.

청정:

SDS-PAGE 기준 95% 이상

분자량

~35kDa

집중:

5 U/μL

활동 단위의 정의:

1 단위는 37도에서 10분 동안 선형화된 pUC19 DNA 5' 말단 1μg의 탈인산화를 촉매하는 데 필요한 효소의 양입니다. 탈인산화는 선형화된 플라스미드 DNA의 연결이 95% 이상 억제되는 것으로 정의됩니다(대장균 형질전환에 의해 결정됨).

10× ALP 반응 완충액:

500 mM Bis-Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM ZnCl2, pH 6.0.

저장(희석) 완충액:

10 mM Tris-HCl, 1 mM MgCl2, 0.01 mM ZnCl2, 50% 글리세롤, pH 7.4.

비활성화 또는 억제

l 억제제: 금속 킬레이트제. ·

l 80도에서 2분간 가열하면 비활성화됩니다.

보관 조건:

–20도에서 최대 12개월까지 보관할 수 있습니다.

 

제품 내용

 

구성요소 번호

요소

G3400-1000U

G3400-1

알칼리성 인산분해효소(감열성)

200 μL

G3400-2

10×ALP 반응 버퍼

1mL

수동

1부

 

분석 프로토콜/절차

 

이 프로토콜은 DNA와 RNA에서 3' 및 5'-인산염 그룹을 제거하는 데 적합합니다.

  • 냉동된 시약을 해동하고 혼합한 후 짧게 원심분리합니다.
  • 효소를 얼음 위에 보관하세요.
  • 10×ALP 반응 버퍼를 실온에서 유지합니다.

1. 다음을 포함하는 다음 반응 혼합물을 준비합니다.

요소

용량

DNA 또는 RNA 샘플

1-5 ug

10×ALP 반응 버퍼

2 μL

알칼리성 인산분해효소(감열성)

1 μL

뉴클레아제가 없는 물

20μL까지

총량

20 μL

 

2. 완전히 혼합하고 잠시 회전시킨 후 37도에서 15-30분 동안 배양합니다. 최적의 배양 시간과 효소 농도는 각 기질에 대해 실험적으로 결정되어야 합니다.

3. 80도에서 2분간 가열하여 반응을 정지시킨다.

4. 후속 실험의 필요에 따라, 상기 탈인산화된 DNA 또는 RNA는 다양한 방법(예: DNA 정제 키트, 페놀성 클로로포름 추출 및 에탄올 침전 방법)으로 정제될 수 있습니다.

 

메모

 

1. 알칼리성 포스파타제는 대부분의 알칼리성 포스파타제와 마찬가지로 Zn2+ 및 Mg2+-의존 효소입니다. ALP 반응 완충액은 효소 활성을 보장하기에 충분한 Zn2+및 Mg2+를 제공합니다.

1. 알칼리성 인산염 분해효소는 금속 킬레이트제(예: EDTA), 무기 인산염 및 인산염 유사체에 의해 억제됩니다.

1. 알칼리성 포스파타제 활성은 환원제(DTT, -ME) 존재 시 감소됩니다.

2. 알칼리성인산분해효소는 취급 시 얼음 위에 배송되어야 하며, 사용 후 즉시 -20도에서 보관해야 합니다.

1. 고객님의 안전과 건강을 위해 보안경, 장갑, 보호복을 착용하시기 바랍니다.

 

연구용으로만 사용하세요!

 

 

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