결론 먼저 :
4 가지 기술 -PCR, QPCR, RT-PCR 및 RT-QPCR-ARE는 중합 효소 연쇄 반응 (PCR)을 기반으로하며, 이들의 적용 필드 및 검출 표적이 주로 다르다.
- PCR은 주로 DNA 서열의 증폭 및 검출에 사용된다.
- QPCR은 DNA 또는 cDNA 함량의 실시간 정량적 검출을 허용합니다.
- RT-PCR은 주로 RNA 분자의 증폭 및 검출에 사용된다.
- RT-QPCR은 RT-PCR 및 QPCR 기술을 결합하여 RNA 분자를 정량적으로 분석합니다.
▆ I. 표준 PCR
1 세대 PCR으로도 알려진 표준 PCR은 이중 가닥 DNA를 주형으로, DNTP를 이중 가닥 DNA를 구체적으로 증폭시키기위한 기질로 사용합니다. 아가 로스 겔 전기 영동은 제품의 질적 분석에 사용됩니다.
PCR 공정은 대략 3 가지 기본 단계로 나눌 수 있습니다 : 고온 변성 (약 95도), 저온 어닐링 (55 ~ 60도) 및 중등도 연장 (약 72도, DNA 폴리머 라제의 최적 반응 온도).
여러 사이클의 변성, 어닐링 및 연장 후, 표적 유전자는 수백만 번 증폭 될 수있다. 겔 전기 영동은 증폭 된 DNA를 검출하는데 사용될 수있다 (식별 및 정제를위한 분자량에 기초한 DNA를 분리).
▆ II. 정량적 실시간 PCR (QPCR)
2 세대 PCR 인 정량적 실시간 PCR은 PCR 증폭 공정의 연장 단계 동안 형광 프로브-표지 된 표적 유전자로부터 실시간 형광 신호를 수집한다. 표적 유전자의 카피 수 또는 발현 수준은 세 가지 매개 변수 사이의 관계, 즉 형광 신호, CT 값 및 표적 유전자의 초기 농도 사이의 관계를 통해 결정된다. 그러나 절대 정량 분석 결과는 CT 값 및 표준 곡선에 의존하기 때문에 소위 "정량화"는 어떤 의미에서 상대적입니다. 또한, 검출 감도, 정확도 및 해상도는 저 Copy 표적 유전자 주형 농도의 미묘한 차이 조건 하에서 제한된다. QPCR에서 일반적으로 사용되는 두 가지 형광 방법은 Taqman 프로브 및 SYBR 녹색입니다.
▆ III. 역전사 PCR (RT-PCR)
역전사 PCR (RT-PCR)은 RNA 스트랜드를 상보적인 DNA (RNA- 의존적 DNA 중합체 또는 역전사 효소 사용)로 역전사시킨 후, PCR (데 옥시 뉴클레오티드 프라이머 및 DNA- 의존성 DNA 중합 효소를 사용하여 DNA 증폭을위한 주형으로 사용된다. 그런 다음 각주기는 표준 PCR 프로토콜에 따라 양을 두 배로 늘립니다. 주형 RNA는 총 RNA, mRNA 또는 시험 관내 전사 된 RNA 생성물 일 수있다.
▆ IV. 실시간 역전사 PCR (RT-QPCR)
실시간 역전사 PCR (RT-QPCR)은 RT-PCR 및 QPCR 기술을 결합하여 RNA 분자를 정량적으로 분석합니다. RT-QPCR은 유전자 발현 분석 및 바이러스 부하 검출과 같은 RNA 발현 수준 연구에서 널리 사용된다.
