제품정보

제품명	고양이. 아니요.	투기.
엑소좀(세포 상등액) 분리용 크로마토그래피 컬럼	G4113-5	5개

제품 설명/소개

엑소좀은 세포에 의해 세포외 공간으로 활발하게 분비되는 균일한 크기와 입자 크기가 30 - 150 nm인 나노 규모의 막성 소포입니다. 이 소포에는 고유의 특정 마커가 있으며 단백질, mRNA, miRNA, 지질 및 기타 물질로 코팅되어 있어 세포 간 물질 및 신호 전달의 통로로 사용될 수 있으며 세포 성장, 세포 증식, 세포 분화, 세포 이동, 혈관 신생 및 종양 성장.

본 제품은 세포 상층액으로부터 엑소좀을 신속하게 분리, 정제하는데 적합한 크기 배제 크로마토그래피 컬럼(SEC)입니다. 본 제품은 세포상층액 농축제를 이용하여 세포상층액 엑소좀을 분리, 농축한 후 세포밖 소포체 분리 크로마토그래피 컬럼을 이용하여 농축된 엑소좀을 정제하는 제품입니다. 고순도, 고활성 엑소좀을 보유할 수 있을 뿐만 아니라 단백질을 효율적으로 제거할 수 있습니다. 초고속 원심분리법에서 초고속 원심력으로 인한 세포외막 구조의 손상을 효과적으로 방지하고, 기존 침전법에서 고농도 단백질 및 기타 물질이 엑소좀의 순도에 미치는 영향을 줄입니다.

보관 및 배송 조건

실온에서 운송; 유효기간은 12개월로 실온에 보관하세요.

제품 내용

구성요소 번호	요소	G4113-5
G4113-1	엑소좀(세포 상등액) 분리용 크로마토그래피 컬럼	5개
G4113-2	세포 상청액 농축물	250mL
제품 매뉴얼		1개

분석 프로토콜/절차

1. 세포 상층액 농도

a) 세포 상청액의 생물학적 샘플을 0.22 μM 필터막으로 여과하고 예비 정제하여 사용합니다.

b) 세포상청 생물학적 시료와 세포상청 농축액을 같은 부피로 혼합하고 15초간 세게 흔든 후 4도 냉장고에 2시간 동안 방치하는 단계;

c) 혼합물을 4도, 10000 x g에서 60분 동안 원심분리기에 놓습니다. 상급체를 폐기하십시오.

d) 5% 부피의 세포 상등액 생물학적 시료로 구성된 1×PBS 완충액을 완전히 재현탁 원심분리 침전에 첨가합니다.

e) 무거운 현탁액에는 엑소좀이 풍부하여 후속 실험에 사용하거나 백업을 위해 -80도에서 냉동할 수 있습니다.

2. 엑소좀 정제를 위한 준비

a) PBS(G4202 권장)와 같은 실온의 멸균 완충액을 준비합니다.

b) 실온, 멸균 0.1M NaOH 시약 및 20% 에탄올을 준비합니다.

c) 분리 컬럼을 사용하기 전, 분리 컬럼의 빨간색 상부 커버를 제거하고 브라켓(G6063 권장)에 올려서 사용하십시오.

3. 엑소좀 분리

a) 나중에 사용하기 위해 세포 상청액 농축물을 농축하고 재현탁한 후 엑소좀 샘플을 준비합니다.

b) 분리컬럼의 흰색 바닥커버를 제거하고, 컬럼 내부의 보호액이 흘러나온 후 완충용액 총 30mL를 일괄 첨가하여 분리컬럼을 세척한다.

c) 체판 위의 완충액이 모두 분리 컬럼으로 들어간 후; 3.a 단계의 예비 엑소좀 샘플 {{0}}.5mL를 취하여 체판 중앙에 첨가합니다(0.5mL 미만인 경우 완충액을 추가하여 최대 0.5mL);

d) 모든 엑소좀 시료가 체판을 통과하여 분리컬럼에 들어간 후 완충용액 2.5mL를 첨가한다.

e) 이전 단계의 완충액이 모두 체판을 통과하여 분리컬럼에 들어간 후, 완충액 1mL를 첨가하고, 동시에 자연 활성 엑소좀이 풍부한 세척액 1mL를 수집하는 단계; 후속 실험에 적용하거나 백업을 위해 -80도에서 동결할 수 있습니다.

4. 분리 후 처리

a) 엑소좀 분리가 완료되면 완충용액 총 30 mL를 일괄 첨가하여 분리 컬럼을 세척하는 단계;

b) 세포 상층액에서 엑소좀을 분리하기 위해 분리 컬럼을 계속 사용해야 하는 경우 3.c)~3.e) 단계를 반복합니다.

c) 세포 상층액에서 엑소좀을 분리하기 위해 분리 컬럼을 계속 사용할 필요가 없는 경우 먼저 0.1M NaOH 5 mL를 첨가하여 분리 컬럼을 세척한 후 총 20 mL의 완충액을 첨가합니다. 일괄적으로 분리 컬럼을 세척하고 균형을 맞춘 다음 20% 에탄올 5mL를 추가하여 분리 컬럼을 세척합니다. 청소 후 분리 컬럼의 흰색 하단 덮개를 덮으십시오. 마지막으로 20% 에탄올 2mL를 첨가하여 수분을 공급하고 분리컬럼의 빨간색 상단을 덮고 조여 분리컬럼을 상온에서 보관합니다.